細胞凍存1.預先配製凍存液:10%dmso+90%胎牛血清,4℃冰箱保存預冷;2.用胰酶對細胞進行消化:倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基,pbs沖洗兩次,用胰酶消化細胞(儘可能溫和);3.再次用完全培養液懸浮細胞,將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中,用滴管輕輕吹打混勻.4.在每支凍存管中加入1ml細胞液,密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期.5.凍存步驟的細緻直接關係到細胞復甦時的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然後轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.這是我實驗中用的protocol,希望能夠幫到你~。
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細胞凍存條件:細胞的凍存過程[朗讀]
細胞凍存1.預先配製凍存液:10%dmso+90%胎牛血清,4℃冰箱保存預冷;2.用胰酶對細胞進行消化:倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基,pbs沖洗兩次,用胰酶消化細胞(儘可能溫和);3.再次用完全培養液懸浮細胞,將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中,用滴管輕輕吹打混勻.4.在每支凍存管中加入1ml細胞液,密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期.5.凍存步驟的細緻直接關係到細胞復甦時的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然後轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.這是我實驗中用的protocol,希望能夠幫到你~。
在凍存管里加15%-30%的甘油保存,-20℃可以短期保存(1-2年),-80℃可以保存很久(10年左右)。
凍存細胞,應用液氮急凍,避免緩慢降溫形成晶體破壞細胞結構,你這個做法,很匪夷所思.別等復甦了,現在趕緊拿出來活化,重新保存吧對你的補充:我拿北京大學生命科學院國家重點實驗室的名義打賭,你那些師兄師姐全是錯的,正好弄反了.正確的步驟是速凍、慢融——液氮速凍,冰上解凍.你們那做法,會有存活的細胞,但是一定比正確步驟少了很多,不信你試試。
細胞凍存管一般要耐低溫-196℃,因為在常壓下,液氮溫度為-196℃;細胞凍存是細胞保存的主要方法之一.利用凍存技術將細胞置於-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復甦細胞用於實驗.標準冷凍速度開始為-1到-2℃/min,當溫度低於-25℃時可加速,到-80℃之後可直接投入液氮內(-196℃)。