細胞凍存條件:細胞的凍存過程[朗讀]

細胞培養不用血清,凍存可以用無血清凍存液配方為細胞條件無血清培養基與含10%二甲基亞碸的新鮮的無血清培養基1比1混勻凍存過程:消化貼壁細胞或收集懸浮細胞,將細胞懸液收集至離心管並1000rpm離心10分鐘,棄上清液用一定量凍存液將細胞重懸,計數並調整細胞密度至100個每毫升左右將細胞懸液分裝至2ml凍存管中,每管1ml並將凍存管口封,貼上標籤做好記錄降溫:4度1小時,負20度1小時,負80度18小時或隔夜,液氮。

一、材料(一)儀器1.凈化工作檯2.離心機3.恆溫水浴箱4.冰箱(4℃、-20℃、7.4%nahco38.dmso(分析純)或無色新鮮甘油二、操作步驟(一)細胞凍存1.配。

細胞凍存1.取待凍存的細胞用胰酶消化(見相關實驗細胞傳代培養部分),用培養基將細胞沖洗下來.800r/min離心5min,棄上清收集細胞.如果是懸浮生長的細胞,則可直接離心收集細胞.2.加入適量凍存液(10%甘油+90%培養基,或者10%dmso+90%培養基)製成細胞懸液.細胞濃度宜大,3*106個/ml左右,並可適量增加牛血清濃度至20%.3.細胞懸液裝入凍存管中.用膠布封裹,做好標記(寫上細胞種類、時間及凍存條件等).4.凍存管在4℃下存放30min,轉放-20℃1.5~2h,再轉人-70℃4-12h後即可轉移到液氮內(-196℃),注意進行登記。

注意:將細胞懸浮好之後,再加入dmso,加入dmso後,馬上懸浮細胞,系入凍存管.4度過夜,放入液氮;如果沒有液氮,-80度凍細胞不好。

(轉載,僅供參考)1.37℃水浴預熱培養液(huvec-004).2.從液氮中取出huvec的細胞管,快速將其置入37℃水浴中解凍,直到管中只剩下最後一片結晶(注意:不要。